Bộ phim Tình Một Đêm hài với câu chuyện thời thượng. Nữ kiến trúc sư Tả Tiểu Hân (Giang Nhất Yến đóng) là một phụ nữ thành công trong sự nghiệp nhưng không thích lấy chồng, chỉ muốn có một đứa con, tình cờ gặp và xảy ra tình một đêm với chàng MC nổi tiếng Tra Nghĩa (Trịnh Khải đóng), kết quả là cậu bé Tả Tùng Tùng chào đời. Vào ngày thôi nôi con trai, Tả Tiểu Hân thông báo cho Trịnh Khải, lúc đó anh mới biết mình có một đứa con và bị bạn bè chọc ghẹo là “ngựa giống”. Tự ái nam nhi nổi lên, Trịnh Khải quyết tâm trả thù Tả Tiểu Hân, giành quyền nuôi con, khai pháo cho một cuộc chiến tưng bừng.